農業(yè)農村部公告 第813號
時(shí)間：2024-08-22 來(lái)源：農業(yè)農村部
為進(jìn)一步加強水產(chǎn)養殖用獸藥研究指導工作，規范新獸藥研究活動(dòng)，加快獸藥產(chǎn)品創(chuàng )新和上市應用，根據《獸藥管理條例》等有關(guān)規定，我部組織修訂了《水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗技術(shù)指導原則》等5個(gè)獸藥技術(shù)指導原則，制定了水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室安全試驗和效力試驗等2個(gè)獸藥技術(shù)指導原則，現予發(fā)布，請參照執行。原農業(yè)部公告第2017號同時(shí)廢止。
特此公告。
附件：
1.水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗技術(shù)指導原則
2.水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗技術(shù)指導原則
3.水產(chǎn)養殖用驅?zhuān)ⅲ┫x(chóng)藥物藥效試驗技術(shù)指導原則
4.水產(chǎn)養殖用驅?zhuān)ⅲ┫x(chóng)藥物田間藥效試驗技術(shù)指導原則
5.水產(chǎn)養殖用消毒劑藥效試驗技術(shù)指導原則
6.水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室安全試驗技術(shù)指導原則
7.水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室效力試驗技術(shù)指導原則
農業(yè)農村部
2024年8月7日
水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗技術(shù)指導原則 水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗用于評價(jià)抗菌藥物防治水產(chǎn)動(dòng)物目標適應證的效果和發(fā)現可能存在的不良反應，以確定藥物的有效性和給藥方案。 本指導原則適用于水產(chǎn)養殖用抗菌藥物的藥效試驗(II 期臨床試驗),僅代表目前對水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗研究的一般性認識，旨在為水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗研究者和注冊申請人制訂、實(shí)施與監督藥效臨床試驗等提供技術(shù)指導和參考。 試驗應遵循《獸藥臨床試驗質(zhì)量管理規范》(獸藥 GCP)的規定。 試驗設計應遵循“隨機、對照、重復”的基本原則。隨機,即按機遇原則進(jìn)行分組、取樣和試驗;對照，進(jìn)行試驗研究必須設立對照組,通過(guò)對照來(lái)鑒別處理因素與非處理因素之間的差異，抵消或減少試驗誤差;重復,即實(shí)驗要有足夠的樣本含量,有重復的例數和平行操作,且試驗結果要有重現性。此外還應考慮均衡原則,均衡就是使對照組與試驗組中的非處理因素盡量達到均衡一致,使處理因素的試驗效應能更真實(shí)地反映出來(lái)。 不同的抗菌藥物作用機制不同,各有特點(diǎn),本指導原則不可能涵蓋水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗研究的全部實(shí)際情況,開(kāi)展藥效試驗研究時(shí)應結合受試藥物的自身特點(diǎn)、受試動(dòng)物及其感染疾病的種類(lèi),遵循“具體問(wèn)題具體分析”的原則,根據實(shí)際情況確定藥效試驗的內容和順序。 每個(gè)試驗水體應能保持環(huán)境穩定,不受外界環(huán)境變化或污染的影響,且相對獨立。試驗水體必須能滿(mǎn)足水產(chǎn)動(dòng)物的生理要求,單位試驗水體體積一般不小于 100L,放養密度應控制在不影響受試動(dòng)物正常生理活動(dòng)的范圍。試驗用水的水質(zhì)應符合 GB11607《漁業(yè)水質(zhì)標準》要求,自來(lái)水應曝氣 48h 以上,天然水應自然沉淀 24h 再過(guò)濾后使用。一般應在以下表格中規定的條件下進(jìn)行試驗,特殊情況下按自然發(fā)病水溫進(jìn)行試驗。
必要時(shí)可采取充氣、換水、控溫等措施以滿(mǎn)足受試動(dòng)物必要的正常生長(cháng)條件,試驗期間應按要求定期測定并記錄水溫、pH、溶解氧或鹽度(海水) 等參數,試驗用水的排放應符合獸藥 GCP 相關(guān)要求。 根據試驗的具體要求,合理選擇相應種類(lèi)的健康水產(chǎn)動(dòng)物,受試動(dòng)物來(lái)源于規范的水產(chǎn)養殖生產(chǎn)單位。試驗前應在試驗環(huán)境暫養 1 ~2 周。試驗用水產(chǎn)動(dòng)物數量應滿(mǎn)足統計學(xué)要求,一般規定每個(gè)試驗組設 3 個(gè)平行,每個(gè)平行的試驗動(dòng)物最低數量:魚(yú)類(lèi)幼體 30 尾,成體 15 尾;蝦、蟹、貝、參類(lèi)幼體(變態(tài)后與成體相似的幼體)40 只,成體 20 只;龜、鱉、蛙類(lèi)幼體(變態(tài)后與成體相似的幼體)20 只,成體 10 只。 1． 受試藥物及來(lái)源。受試藥物應與擬上市的制劑完全一致,有相應的產(chǎn)品質(zhì)量標準。受試藥物應采用一定規模生產(chǎn)的一個(gè)批次樣品,產(chǎn)品處方、制備工藝、設備應與最終生產(chǎn)條件一致,并在GMP 車(chē)間生產(chǎn)。受試藥物需有名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格)、貯藏條件等信息,并具有農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 2． 對照藥物及來(lái)源。對照藥物應當已在我國批準上市,與受試藥物作用相似、適應證相同的藥物。對照藥物由申報單位提供,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。無(wú)符合要求的對照藥物時(shí),選擇安慰劑作為對照藥物。 采用的疾病模型包括人工感染和自然感染兩種,可能的情況下,盡量采用人工感染。 1． 人工感染。感染用的菌種應為具有代表性的標準致病菌種或專(zhuān)業(yè)機構鑒定保藏的菌種。如果采用自然感染病例分離的菌株,應詳細記錄其來(lái)源,并應經(jīng)專(zhuān)業(yè)科研或檢測機構鑒定方可用于試驗。攻毒前需測定其包括受試藥物和對照藥物(但不限于受試藥物和對照藥物)在內的最低抑菌濃度(MIC),必要時(shí)測定最低殺菌濃度(MBC)。感染前需進(jìn)行預試驗。感染途徑可采用注射、浸浴和涂抹病原菌等感染方式。感染量以能使 80% 以上感染動(dòng)物死亡或出現明顯發(fā)病癥狀的劑量為最佳。試驗菌株經(jīng)培養后配制成一定濃度的菌液,按照預實(shí)驗確定感染途徑和感染量進(jìn)行感染。 也可采用與自然感染水產(chǎn)動(dòng)物同居進(jìn)行感染,但應對所用的自然感染水產(chǎn)動(dòng)物的致病菌進(jìn)行分離鑒定,以便確診病原。 人工感染的病例需通過(guò)發(fā)病過(guò)程和臨床癥狀診斷,證明水產(chǎn)動(dòng)物已感染接種致病菌并發(fā)病后才能作為試驗病例。通過(guò)臨床癥狀不能診斷的,可通過(guò)對致病菌的分離鑒定進(jìn)一步確診。 2． 自然感染。應制訂自然感染病例入選條件。通過(guò)發(fā)病過(guò)程、臨床癥狀、病理剖檢、致病菌的分離鑒定,或血清學(xué)診斷,確診為試驗所需致病菌感染的發(fā)病動(dòng)物才能作為試驗病例,各組試驗病例的發(fā)病嚴重程度應基本一致。 應采用隨機分組原則,試驗組數取決于抗菌藥物的類(lèi)型、疾病的特征以及有效劑量的篩選等因素,臨床試驗一般應滿(mǎn)足如下要求: 4． 受試藥物組,根據受試藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、體外抑菌試驗以及劑量篩選的試驗結果初步確定的給藥劑量,至少設高、中、低三個(gè)劑量組,中劑量一般為擬推薦劑量。 如受試藥物為復方制劑,應根據組方中各主要成分,分別增設單方藥物的推薦劑量對照組。 臨床試驗采用受試藥物擬推薦的給藥途徑,注射給藥應標明注射部位。若受試藥物有多種給藥途徑,應該對每種給藥途徑分別進(jìn)行試驗。根據受試藥物特性和藥代動(dòng)力學(xué)、體外抑菌試驗結果制定合理的給藥劑量、頻次和療程。 一般要求在感染后個(gè)別動(dòng)物出現癥狀即開(kāi)始給藥;自然感染病例在病因確診后開(kāi)始給藥。 結合受試抗菌藥物的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性、受試水產(chǎn)動(dòng)物、藥效試驗研究方案等確定觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)和觀(guān)察時(shí)長(cháng)。一般要求在停止給藥后還應繼續觀(guān)察 7 天以上。 試驗期間每天觀(guān)察和記錄各組受試水產(chǎn)動(dòng)物的發(fā)病時(shí)間、發(fā)病數、死亡時(shí)間、死亡數或存活數、癥狀出現或消失數等,同時(shí)注意采食量和行為的觀(guān)察。對于試驗期間死亡動(dòng)物須進(jìn)行病理檢查或病原菌分離,以確認受試動(dòng)物是否因病原菌感染引起,如因其它原因死亡的,統計時(shí)應剔除。試驗結束后,對存活動(dòng)物進(jìn)行病理檢查。 應根據詳細的試驗記錄,計算各組受試動(dòng)物發(fā)病率或死亡率、 發(fā)病率(% )= 發(fā)病動(dòng)物數/ 受試動(dòng)物數×100% ; 死亡率(% )= 死亡動(dòng)物數/ 受試動(dòng)物數×100% ; 有效率(% )= 癥狀好轉動(dòng)物數/ 發(fā)病動(dòng)物數×100% ; 治愈率(% )= 癥狀消失動(dòng)物數/ 發(fā)病動(dòng)物數×100% 。 必要時(shí),也可以配合采用其它指標進(jìn)行評價(jià)。 1． 試驗的可靠性。在整個(gè)試驗中,對照藥物組必須有效,感染不給藥對照組死亡率≥80% 或發(fā)病率≥80% ,不感染不給藥對照組存活率≥90% ,否則試驗需重做。 2． 試驗的有效性。以發(fā)病率或死亡率、有效率和/ 或治愈率進(jìn)行判斷,并將受試藥物組間、受試藥物組與對照組(包括不感染不給藥對照組、對照藥物組或感染不給藥對照組)進(jìn)行比較,對結果進(jìn)行定性和定量的統計分析。常用的生物統計方法有 t 檢驗、x2檢驗、方差分析等,應根據實(shí)際情況進(jìn)行選用。 3． 結論。根據臨床癥狀、病理學(xué)變化觀(guān)察和統計學(xué)分析結果,確定受試藥物對本適應證的有效劑量及臨床推薦劑量;并提出臨床應用該藥物的注意事項、不良反應等。 為公正、科學(xué)地評價(jià)藥物的臨床療效,試驗報告應包括如下內容: 3． 試驗設計者、負責人、主要試驗人員及聯(lián)系方式; 4． 試驗水質(zhì)條件:如水溫、溶解氧、pH、鹽度等; 5． 受試藥物需注明藥物名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格),對照藥物還需注明用法用量; 6． 試驗動(dòng)物的品種、來(lái)源、體重或體長(cháng)、年齡、健康狀況及檢疫情況等; 8． 試驗觀(guān)察現象與結果、數據處理與效果評價(jià)等; 12． 應歸檔保存原始資料,并注明保存地點(diǎn)、聯(lián)系人及聯(lián)系電話(huà)。水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗技術(shù)指導原則 水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗用于進(jìn)一步驗證水產(chǎn)養殖用抗菌藥物在實(shí)際生產(chǎn)條件下對靶動(dòng)物目標適應證的有效性和安全性。 本指導原則適用于水產(chǎn)動(dòng)物用抗菌藥物的田間藥效試驗,僅代表目前對水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗研究的一般性認識,旨在為水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗研究者和注冊申請人制訂、實(shí)施與監督臨床藥效試驗等提供技術(shù)指導和參考。 試驗應遵循《獸藥臨床試驗質(zhì)量管理規范》 (獸藥 GCP) 的規定。 田間藥效試驗應在水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗結果的基礎上進(jìn)行,參照水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗的試驗方案,并結合實(shí)際養殖條件、環(huán)境情況和病情等綜合考慮。 水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗的建立主要包括試驗池、受試水產(chǎn)動(dòng)物和數量的選擇,試驗藥物的說(shuō)明,給藥方案以及觀(guān)察指標的確定等。 田間試驗須安排在歷年發(fā)病地區,飼養規范,實(shí)驗條件能得到有效控制的養殖場(chǎng)進(jìn)行。試驗養殖單元可為水產(chǎn)養殖生產(chǎn)上所用的池塘、網(wǎng)箱及工廠(chǎng)化養殖車(chē)間等設施,每個(gè)試驗養殖單元應相對獨立,并配備必要的養殖工具和設施。同一區域內試驗池要求位置、面積、環(huán)境條件基本相似。養殖品種、放養密度、歷史條件和病史基本一致。 試驗期間應測定并記錄試驗池水的水溫、溶解氧、pH 值、氨氮、亞硝酸鹽和鹽度(海水)等水質(zhì)指標。 1． 數量。選用自然感染的水產(chǎn)動(dòng)物或人工控制感染的水產(chǎn)動(dòng)物,每個(gè)養殖單元水產(chǎn)動(dòng)物數應不少于 300 尾(只),珍稀水產(chǎn)動(dòng)物視情況而定。 2． 品種。應與受試藥物擬推薦應用范圍相一致。不同靶動(dòng)物品種和不同適應證應分別進(jìn)行田間藥效試驗。應測定并記錄放養動(dòng)物的種類(lèi)、規格、比例、數量等指標。 3． 抽檢動(dòng)物數。每個(gè)平行組分別在給藥前和給藥療程結束后進(jìn)行抽檢(必要時(shí),需在觀(guān)察過(guò)程中抽檢一次),隨機抽取水產(chǎn)動(dòng)物的最低檢查數量應不低于 15 尾(只)。 1． 受試藥物及來(lái)源。受試藥物應與擬上市的制劑完全一致,有相應的產(chǎn)品質(zhì)量標準。受試藥物應采用一定規模生產(chǎn)的一個(gè)批次樣品,產(chǎn)品處方、制備工藝、設備應與最終生產(chǎn)條件一致,并在GMP 車(chē)間生產(chǎn)。 受試藥物需注明其名稱(chēng)、主要輔料、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格)、保存條件,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 2． 對照藥物及來(lái)源。對照藥物應當已在我國批準上市,與受試藥物靶動(dòng)物以目為分類(lèi)基礎相似、作用相似、適應證相同。對照藥物由申報單位提供,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。無(wú)符合要求的對照藥物時(shí),選擇安慰劑作為對照藥物。 選擇的自然感染病例應通過(guò)發(fā)病過(guò)程、臨床癥狀、病理剖檢、致病菌的分離鑒定或者快速診斷來(lái)確診,只有符合試驗所需致病菌感染的發(fā)病動(dòng)物才能作為試驗病例,各組試驗病例的發(fā)病嚴重程度應基本一致。每個(gè)單元確診不少于 5 尾。 田間藥效的試驗組數取決于抗菌藥物的類(lèi)型和疾病的特征,也可根據實(shí)驗室藥效試驗的結果來(lái)確定。 試驗分組應設對照藥物組和受試藥物組,條件允許的情況下,設置不給藥對照組,受試藥物組設 2 ~ 3 個(gè)平行。對于有推薦劑量范圍的,至少設高、低二個(gè)劑量組。 根據水產(chǎn)養殖用抗菌藥物藥效試驗確定的用法和用量進(jìn)行試驗。試驗期間不得使用其他藥物。 治療試驗在停止給藥后繼續觀(guān)察不得少于 7 天。 試驗期間每天觀(guān)察和記錄各組受試水產(chǎn)動(dòng)物的攝食量、活動(dòng)狀態(tài)、癥狀、死亡數和死亡時(shí)間等,并進(jìn)行分析。同時(shí)觀(guān)察和記錄試驗期間動(dòng)物可能出現的不良反應。必要時(shí),對受試動(dòng)物進(jìn)行病理檢查和病原分離,以確認受試動(dòng)物是否因目標病原菌感染發(fā)病,如因其它原因死亡的,統計時(shí)應剔除。 應根據試驗記錄計算各組試驗動(dòng)物的死亡率或治愈率。其計算公式如下: 死亡率(% )= 死亡動(dòng)物數/ 受試動(dòng)物數×100% ; 治愈率(% )= (用藥前抽檢發(fā)病率-用藥后抽檢發(fā)病率) / 用藥前抽檢發(fā)病率×100% ; 1． 試驗的可靠性。在整個(gè)試驗中,對照藥物組必須有效,否則試驗需重做。 2． 試驗的有效性。試驗以死亡率或治愈率進(jìn)行判斷,計算每個(gè)受試藥物組每個(gè)平行的死亡率,并與對照藥物組進(jìn)行比較,對結果選擇合適的生物統計分析方法進(jìn)行分析,考察受試藥物組與對照藥物組的差異性。 3． 結論。根據攝食量、活動(dòng)狀態(tài)、癥狀和死亡率等,確認受試藥物的推薦劑量;并提出或確認臨床應用該藥物的注意事項、不良反應等。 為公正、科學(xué)地評價(jià)藥物的臨床療效,試驗報告應包括如下內容: 2． 試驗時(shí)間與地點(diǎn),天氣情況; 3． 試驗設計者、負責人、主要試驗人員及聯(lián)系方式; 4． 試驗池塘需注明換水率,水溫、溶解氧、pH、氨氮、亞硝酸鹽氮、硬度、鹽度、等水質(zhì)條件; 5． 受試藥物需注明藥物名稱(chēng)、主要輔料、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格),對照藥物還需注明用法用量; 6． 試驗動(dòng)物的品種、來(lái)源、體重或體長(cháng)、年齡、健康狀況及檢疫情況等; 8． 試驗觀(guān)察現象與結果、數據處理與效果評價(jià)等;用藥后水體其他生物的異常情況; 12． 應歸檔保存原始資料,并注明保存地點(diǎn)、聯(lián)系人及聯(lián)系電話(huà)。水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗技術(shù)指導原則 水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物的藥效試驗用于評價(jià)驅(殺)蟲(chóng)藥物防治水產(chǎn)動(dòng)物目標適應證的效果和發(fā)現可能存在的不良反應,以確定藥物的有效性和給藥方案。 本指導原則適用于水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物的藥效試驗(II 期臨床試驗),僅代表目前對水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗研究的一般性認識,旨在為水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗研究者和注冊申請人制訂、實(shí)施與監督藥效臨床試驗等提供技術(shù)指導。 試驗應遵循《獸藥臨床試驗質(zhì)量管理規范》(獸藥 GCP)的規定。 試驗設計應遵循“隨機、對照、重復”的基本原則。隨機,即按機遇原則進(jìn)行分組、取樣和試驗;對照,進(jìn)行試驗研究必須設立對照組,通過(guò)對照來(lái)鑒別處理因素與非處理因素之間的差異,抵消或減少試驗誤差;重復,即試驗結果要有重現性,要有重復例數和平行操作,且試驗結果要有重現性。此外還應考慮均衡原則,均衡就是使對照組與試驗組中的非處理因素盡量達到均衡一致,使處理因素的試驗效應能更真實(shí)地反映出來(lái)。 不同的驅(殺)蟲(chóng)藥物作用機制不同,各有特點(diǎn),本指導原則不可能涵蓋水產(chǎn)動(dòng)物用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗研究的全部實(shí)際情況,當進(jìn)行藥效試驗研究時(shí)應結合該藥物的自身特點(diǎn)、試驗水產(chǎn)動(dòng)物及其感染疾病的種類(lèi),遵循“具體問(wèn)題具體分析”的原則,根據實(shí)際情況確定藥效試驗的內容和順序。 每個(gè)試驗水體應能保持環(huán)境穩定、不受外界環(huán)境突然變化或污染影響,相對獨立。試驗水體必須能滿(mǎn)足水產(chǎn)動(dòng)物的生理要求,單位試驗水體體積一般不小于 100L,放養密度應控制在不影響受試動(dòng)物正常生理活動(dòng)的范圍。 試驗用水的水質(zhì)應符合 GB11607《漁業(yè)水質(zhì)標準》要求,自來(lái)水應曝氣 48h 以上,天然水應自然沉淀 24h 再過(guò)濾后使用。一般應在以下表格中規定的條件下進(jìn)行試驗,特殊情況下按自然發(fā)病水溫進(jìn)行試驗。 必要時(shí)可采取充氣、換水、控溫等措施滿(mǎn)足以上規定的試驗條件,試驗期間應按要求定期測定并記錄水溫、pH、溶解氧或鹽度(海水)等參數,試驗用水的排放應符合獸藥 GCP 相關(guān)要求。 根據試驗的具體要求,合理選擇相應種類(lèi)的健康水產(chǎn)動(dòng)物,受試動(dòng)物來(lái)源于規范的水產(chǎn)養殖生產(chǎn)單位。試驗前應在試驗環(huán)境暫養 1 ~2 周。 試驗用水產(chǎn)動(dòng)物數量應滿(mǎn)足統計學(xué)要求,一般規定每個(gè)試驗組設 3 個(gè)平行,每個(gè)平行的試驗動(dòng)物最低數量:魚(yú)類(lèi)幼體(變態(tài)后與成體相似的幼體)30 尾,成體 15 尾;蝦、蟹、貝類(lèi)幼體(變態(tài)后與成體相似的幼體)40 只,成體 20 只;龜、鱉、蛙類(lèi)幼體(變態(tài)后與成體相似的幼體)20 只,成體 10 只。 1． 受試藥物及來(lái)源。受試藥物應與擬上市的制劑完全一致,有相應的產(chǎn)品質(zhì)量標準。受試藥物應采用一定規模生產(chǎn)的一個(gè)批次樣品,產(chǎn)品處方、制備工藝、設備應與最終生產(chǎn)條件一致,并在GMP 車(chē)間生產(chǎn)。 受試藥物需有名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格)、貯藏條件等信息,并具有農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 2． 對照藥物及來(lái)源。對照藥物應當已在我國批準上市,與受試藥物作用相似、適應證相同的藥物。對照藥物由申報單位提供,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。無(wú)符合要求的對照藥物時(shí),選擇安慰劑作為對照藥物。 1． 人工感染。感染用的蟲(chóng)種可以為臨床分離或采集的蟲(chóng)種,應詳細記錄其來(lái)源,且必須進(jìn)行嚴格的病原鑒定。感染前需進(jìn)行預試驗。感染方法和途徑可根據寄生蟲(chóng)體種類(lèi)決定。感染量應根據預實(shí)驗的結果,選擇原則上能使 90% 以上動(dòng)物感染的劑量,選取感染程度(癥狀表現、蟲(chóng)體密度等特征) 基本一致的個(gè)體進(jìn)行試驗。以損傷或致死性的方式才能觀(guān)察寄生蟲(chóng)感染情況的個(gè)體,感染率原則上應達到 70% 。
也可采用健康動(dòng)物與自然感染個(gè)體進(jìn)行同居感染,但應對所用的自然感染個(gè)體的致病蟲(chóng)體進(jìn)行分離鑒定,以便確定病原種類(lèi)。 2． 自然感染。采用自然感染的水產(chǎn)動(dòng)物,應制訂自然感染病例入選條件。通過(guò)臨床癥狀、病理剖檢、致病蟲(chóng)種的鑒定,確診為試驗所需致病蟲(chóng)體感染的發(fā)病物才能作為試驗病例,各組試驗病例的發(fā)病嚴重程度應基本一致。 人工感染和自然感染病例的確診。水產(chǎn)動(dòng)物體表及鰓絲感染的蟲(chóng)體,試驗前應隨機抽取水產(chǎn)動(dòng)物樣品不少于 10 尾(只),輕輕刮取體表粘液或剪取小塊鰓絲涂片鏡檢,感染率原則上應達到90% 以上。 水產(chǎn)動(dòng)物體內感染的蟲(chóng)體,試驗前應隨機抽取水產(chǎn)動(dòng)物樣品不少于 10 尾(只),進(jìn)行剖殺后檢查組織或器官中蟲(chóng)體數,感染率原則上應達到 70% 。 3． 體外殺蟲(chóng)試驗。特殊情況下,可進(jìn)行離體(體外) 殺蟲(chóng)試驗。 如中華鳋或多態(tài)錨頭鳋,采集成蟲(chóng)若干,在適宜條件下孵化后,收集幼蟲(chóng)進(jìn)行體外殺蟲(chóng)試驗。 試驗組數取決于驅(殺)蟲(chóng)藥物的類(lèi)型、疾病的特征以及有效劑量的篩選等因素,試驗應滿(mǎn)足如下分組要求: 4．受試藥物組,根據受試藥物劑量篩選的試驗結果,確定給藥劑量,至少設高、中、低三個(gè)劑量組,中劑量一般為擬推薦劑量。如受試藥物為復方制劑,藥物對照組應根據組方中各主要成分,分別設單方藥物的推薦劑量對照組。 臨床試驗一般采用該藥擬推薦的給藥方案。受試藥物若有多種給藥方式,應該對每種給藥方式分別進(jìn)行試驗。 根據寄生蟲(chóng)的生活史,結合受試藥物的藥效學(xué)、受試動(dòng)物、藥效試驗研究方案等確定觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)和觀(guān)察時(shí)長(cháng)。 一般要求在停止給藥后繼續觀(guān)察,口服驅蟲(chóng)藥物時(shí)間不得少于 10 天,浸浴殺蟲(chóng)藥物時(shí)間不得少于 7 天。 給藥前進(jìn)行寄生蟲(chóng)學(xué)檢查,按不同種類(lèi)的寄生蟲(chóng),分別檢查受試動(dòng)物的體表、鰓、血液、腸道等器官或組織,分類(lèi)鑒定并計數。 給藥后及時(shí)觀(guān)察受試動(dòng)物健康狀況、行為特征和攝食情況,必要時(shí)進(jìn)行生理生化指標檢查。 記錄給藥前后每天動(dòng)物的死亡數。驅殺體表寄生蟲(chóng)試驗給藥后,應定期隨機抽樣檢查蟲(chóng)體存活情況,并分類(lèi)鑒定計數,同時(shí)記錄平均殘存蟲(chóng)體數及殘存蟲(chóng)體動(dòng)物數。 驅殺體內寄生蟲(chóng)試驗結束后,將全部試驗水產(chǎn)動(dòng)物剖殺,檢查殘存的蟲(chóng)體或蟲(chóng)卵,分類(lèi)鑒定并計數,同時(shí)記錄平均殘存蟲(chóng)體數及殘存蟲(chóng)體動(dòng)物數。 應根據詳細的試驗記錄,計算驅(殺)蟲(chóng)率、驅凈率以及受試動(dòng)物的日死亡率、總死亡率。 公式如下: 驅(殺)蟲(chóng)率(% )= (感染不給藥對照組平均殘留存活蟲(chóng)體數-受試藥物組平均殘留存活蟲(chóng)體數) / 感染不給藥對照組平均殘留存活蟲(chóng)體數×100% ; 驅凈率(% )= 驅凈蟲(chóng)體的動(dòng)物數/ 全部試驗動(dòng)物數×100% ; 日死亡率(% )= 每日死亡動(dòng)物數/ 全部試驗動(dòng)物數×100% ; 總死亡率(% ) = 試驗期間死亡動(dòng)物總數/ 全部試驗動(dòng)物數×100% 。 1． 試驗的可靠性。在整個(gè)試驗中,對照藥物組必須有效,感染不給藥組感染率原則上應達到 70% 以上,不感染不給藥組死亡率≤5% 。 2． 試驗的有效性。將受試藥物組間、受試藥物組與對照藥物組進(jìn)行比較,對驅(殺) 蟲(chóng)率、驅凈率、死亡率等數據進(jìn)行統計分析。 評價(jià)指標根據疾病發(fā)生的具體情況選擇。 常用的生物統計方法有 t 檢驗、x 2 檢驗和方差分析等,應根據實(shí)際情況進(jìn)行選用。 3． 結論。確認受試藥物對本適應證的治療效果及其推薦劑量;并提出臨床應用該藥物的注意事項、不良反應以及藥物的相互作用等。 為公正、科學(xué)地評價(jià)藥物的臨床療效,試驗報告應包括如下內容: 3． 試驗設計者、負責人、主要試驗人員及聯(lián)系方式; 5． 受試藥物需注明藥物名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格),對照藥物還需注明用法用量; 6． 試驗動(dòng)物的品種、來(lái)源、體重或體長(cháng)、年齡、健康狀況及檢疫情況等; 8． 試驗觀(guān)察現象與結果、數據處理與效果評價(jià)等; 12． 應歸檔保存原始資料,并注明保存地點(diǎn)、聯(lián)系人及聯(lián)系電話(huà)。水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物田間藥效試驗技術(shù)指導原則 水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物的田間藥效試驗用于進(jìn)一步驗證水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物在實(shí)際生產(chǎn)條件下對靶動(dòng)物目標適應證的有效性和安全性。 本指導原則適用于水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物的田間藥效試驗,僅代表目前對水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物田間藥效試驗研究的一般性認識,旨在為水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物田間藥效試驗研究者和注冊申請人制訂、實(shí)施與監督藥效臨床試驗等提供技術(shù)指導和參考。 試驗應遵循《獸藥臨床試驗質(zhì)量管理規范》 (獸藥 GCP) 的規定。 田間藥效試驗應在水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗結果的基礎上進(jìn)行,參照水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗的試驗方案,并結合實(shí)際養殖條件、環(huán)境情況和病情等綜合考慮。 田間試驗須安排在歷年發(fā)病地區,飼養規范,實(shí)驗條件能得到有效控制的養殖場(chǎng)進(jìn)行。 試驗養殖單元可為水產(chǎn)養殖生產(chǎn)上所用的池塘、網(wǎng)箱及工廠(chǎng)化養殖車(chē)間等設施,每個(gè)試驗養殖單元應相對獨立,并配備必要的養殖工具和設施。 同一區域內試驗池要求位置、面積、環(huán)境條件基本相似。 養殖品種、放養密度、歷史條件和病史基本一致。 試驗期間應測定并記錄試驗池水的水溫、溶解氧、pH、氨氮、亞硝酸鹽和鹽度(海水)等水質(zhì)指標。 1． 受試動(dòng)物要求。選用自然感染的水產(chǎn)動(dòng)物或人工控制感染的水產(chǎn)動(dòng)物,每個(gè)養殖單元水產(chǎn)動(dòng)物數應不少于 300 尾(只),珍稀水產(chǎn)動(dòng)物視情況而定。 2． 品種。應與受試藥物擬推薦應用范圍相一致。不同靶動(dòng)物品種和不同適應證應分別進(jìn)行田間藥效試驗。 應測定并記錄放養動(dòng)物的種類(lèi)、規格、比例、數量等指標。 3． 抽檢動(dòng)物數。每個(gè)平行組分別在給藥前和給藥療程結束后進(jìn)行抽檢(必要時(shí),需在觀(guān)察過(guò)程中抽檢一次),隨機抽取水產(chǎn)動(dòng)物的最低檢查數量應不低于 15 尾(只)。 1． 受試藥物及來(lái)源。受試藥物應與擬上市的制劑完全一致,有相應的產(chǎn)品質(zhì)量標準。 受試藥物應采用一定規模生產(chǎn)的一個(gè)批次樣品,產(chǎn)品處方、制備工藝、設備應與最終生產(chǎn)條件一致,并在GMP 車(chē)間生產(chǎn)。 受試藥物需注明其名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量( 或規格)、保存條件,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 2． 對照藥物及來(lái)源。對照藥物應當已在我國批準上市,與受試藥物作用相似、適應證相同。 對照藥物由申報單位提供,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 無(wú)符合要求的對照藥物時(shí),選擇安慰劑作為對照藥物。 水產(chǎn)動(dòng)物體表及鰓絲感染的蟲(chóng)體,輕輕刮取體表粘液或剪取小塊鰓絲等病灶涂片鏡檢,確定給藥前的感染率和感染強度。 水產(chǎn)動(dòng)物體內感染的蟲(chóng)體,進(jìn)行剖殺后檢查組織或器官中目標蟲(chóng)體數,確定給藥前的感染率和感染強度。 田間藥效的試驗組數取決于驅(殺)蟲(chóng)藥物的類(lèi)型和疾病的特征,也可根據實(shí)驗室藥效試驗的結果來(lái)確定。試驗分組應設對照藥物組和受試藥物組,條件允許的情況下,設置不給藥對照組,受試藥物組設 2 ~ 3 個(gè)平行。 對于有推薦劑量范圍的,至少設高、低二個(gè)劑量組。 根據水產(chǎn)養殖用驅(殺)蟲(chóng)藥物藥效試驗確定的用法和用量進(jìn)行試驗,受試藥物若有多種給藥方式,應該對每種給藥方式分別進(jìn)行試驗。 試驗期間不得使用其他藥物。 根據寄生蟲(chóng)的生活史,結合受試藥物的藥效學(xué)、受試動(dòng)物、藥效試驗研究方案等確定觀(guān)察時(shí)間點(diǎn)和觀(guān)察時(shí)長(cháng)。 一般要求在停止給藥后繼續觀(guān)察,口服驅蟲(chóng)藥物時(shí)間不得少于 10 天,浸浴殺蟲(chóng)藥物時(shí)間不得少于 7 天。 給藥前進(jìn)行寄生蟲(chóng)學(xué)檢查,按不同種類(lèi)的寄生蟲(chóng),分別檢查受試動(dòng)物的體表、鰓、血液、腸道等器官或組織,分類(lèi)鑒定并計數。給藥后及時(shí)觀(guān)察受試動(dòng)物健康狀況、行為、攝食以及死亡情況,并對死亡病例進(jìn)行剖檢。 必要時(shí)進(jìn)行生理生化指標檢查。 驅殺體表寄生蟲(chóng)試驗給藥后,應定期隨機抽樣檢查蟲(chóng)體存活情況,并分類(lèi)鑒定計數,同時(shí)記錄平均殘存蟲(chóng)體數及殘存蟲(chóng)體動(dòng)物數。 驅殺體內寄生蟲(chóng)試驗結束后,將隨機抽取一定數量的試驗水產(chǎn)動(dòng)物進(jìn)行剖殺,檢查殘存的蟲(chóng)體或蟲(chóng)卵,鑒定并分類(lèi)計數,同時(shí)記錄平均殘存蟲(chóng)體數及殘存蟲(chóng)體動(dòng)物數。 應根據詳細的試驗記錄,計算驅(殺)蟲(chóng)率、驅凈率以及受試動(dòng)物的日死亡率。 公式如下: 驅(殺)蟲(chóng)率(% )= (用藥前平均殘留存活蟲(chóng)體數-用藥后平均殘留存活蟲(chóng)體數) / 用藥前平均殘留存活蟲(chóng)體數×100% ; 驅凈率(% )= (用藥前抽檢帶蟲(chóng)率-用藥后抽檢帶蟲(chóng)率) / 用藥前抽檢帶蟲(chóng)率×100% ; 日死亡率(% )= 每日死亡動(dòng)物數/ 全部試驗動(dòng)物數×100% ; 總死亡率(% ) = 試驗期間死亡動(dòng)物總數/ 全部試驗動(dòng)物數×100% 。 1． 試驗的可靠性。在整個(gè)試驗中,對照藥物組必須有效,否則試驗需重做。 2． 試驗的有效性。將受試藥物組間、受試藥物組與對照藥物組進(jìn)行比較,對驅(殺) 蟲(chóng)率、驅凈率、死亡率等數據進(jìn)行統計分析。 常用的生物統計方法有 t 檢驗、x 2 檢驗和方差分析等,應根據實(shí)際情況進(jìn)行選用。 3． 結論。確認受試藥物對本適應證的治療效果及其推薦劑量;并提出或確認臨床應用該藥物的注意事項、不良反應等。 為公正、科學(xué)地評價(jià)藥物的臨床療效,試驗報告應包括如下內容: 2． 試驗時(shí)間與地點(diǎn),天氣情況; 3． 試驗設計者、負責人、主要試驗人員及聯(lián)系方式; 4． 試驗水質(zhì)條件:如水溫、溶解氧、pH、鹽度等; 5． 受試藥物需注明藥物名稱(chēng)、主要輔料、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格)、推薦使用的方法用量,對照藥物還需注明用法用量; 6． 試驗動(dòng)物的品種、來(lái)源、體重或體長(cháng)、年齡、健康狀況及檢疫情況等; 8． 試驗觀(guān)察現象與結果、數據處理與效果評價(jià)等;用藥后水體其他生物的異常情況; 12． 應歸檔保存原始資料,并注明保存地點(diǎn)、聯(lián)系人及聯(lián)系電話(huà)。水產(chǎn)養殖用消毒劑藥效試驗技術(shù)指導原則 水產(chǎn)養殖用消毒劑的藥效試驗用于評價(jià)水產(chǎn)養殖用消毒劑對水產(chǎn)動(dòng)物機體外環(huán)境、工具及設施的消毒效果和(或)水產(chǎn)動(dòng)物目標適應證的防治效果的相關(guān)試驗,以確定消毒劑的有效性和合理使用方案,并發(fā)現可能存在的不良反應。 本指導原則適用于水產(chǎn)養殖用消毒劑的藥效試驗(包括消毒效果試驗和目標適應證的防治效果試驗),僅代表目前對水產(chǎn)養殖用消毒劑藥效試驗研究的一般性認識,旨在為水產(chǎn)養殖用消毒劑藥效試驗研究者和注冊申請人制訂、實(shí)施與監督藥效臨床試驗等提供技術(shù)指導和參考。 新研制、仿制及其復合型水產(chǎn)養殖用消毒劑需根據本指導原則要求完成全部消毒試驗項目;已批準在衛生或陸生動(dòng)物上使用的消毒劑移植水產(chǎn)動(dòng)物使用時(shí),需完成實(shí)驗室定性、定量消毒效果試驗和現場(chǎng)消毒試驗;國外注冊水產(chǎn)養殖用消毒劑需復核定量及現場(chǎng)消毒試驗;以潑灑或藥浴方式用于養殖水體,并具有治療水產(chǎn)動(dòng)物疾病功效的消毒劑除完成相關(guān)要求的消毒效果試驗外,還需進(jìn)行田間藥效試驗。 試驗應遵循《獸藥臨床試驗質(zhì)量管理規范》 (獸藥 GCP) 的規定。 試驗設計應遵循“隨機、對照、重復”的基本原則。隨機,即按機遇原則進(jìn)行分組、取樣和試驗;對照,進(jìn)行試驗研究必須設立對照組,通過(guò)對照來(lái)鑒別處理因素與非處理因素之間的差異,抵消或減少試驗誤差;重復,即試驗要有足夠的樣本含量,有重復的例數和平行操作,且試驗結果要有重現性。 此外還應考慮均衡原則,均衡就是使對照組與試驗組中的非處理因素盡量達到均衡一致,使處理因素的試驗效應能更真實(shí)地反映出來(lái)。 1． 菌毒種。試驗用菌(毒)種應為具有代表性的標準致病菌(毒)種或專(zhuān)業(yè)機構鑒定保藏的菌(毒)種。 如果采用自然感染病例分離的菌株,應詳細記錄其來(lái)源,并應經(jīng)專(zhuān)業(yè)科研或檢測機構鑒定方可用于試驗。 在選擇消毒試驗用的致病病毒株時(shí),注意所用病毒株應代表一個(gè)很明確的病毒組,抵抗力強,容易管理并可高滴度生長(cháng),且易于純化。 水產(chǎn)動(dòng)物臨床常見(jiàn)的、有代表性的菌(毒)種如下所示,根據消毒劑特定用途或試驗特殊需要,可增選其它菌(毒)株。 (1) 細菌繁殖體。氣單胞菌(Aeromonas);愛(ài)德華氏菌( Ed-wardsiella);弧菌(Vibrio);鏈球菌(Streptococcus);黃桿菌(Flavobac-terium)。 (2)細菌芽孢?？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)。 (3)真菌(根據用途選做)。水霉(Saprolegnia)。 2． 培養基。普通肉湯培養基、營(yíng)養瓊脂培養基、馬丁肉湯培養基、馬丁瓊脂培養基、沙堡液體培養基、沙堡瓊脂培養基及其與試驗菌種相對應有特別要求的培養基。 培養基的選用和配制方法見(jiàn)獸藥典。 (1)受試消毒劑及來(lái)源。受試消毒劑應與擬上市的制劑完全一致,有相應的產(chǎn)品質(zhì)量標準。 受試藥物應采用一定規模生產(chǎn)的一個(gè)批次樣品,產(chǎn)品處方、制備工藝、設備應與最終生產(chǎn)條件一致,并在 GMP 車(chē)間生產(chǎn)。受試消毒劑需注明其名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格)、保存條件,并提供農業(yè)農村部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 對照消毒劑應當已在我國批準上市,與受試消毒劑作用相似、適應證或用途相同。 由申報單位提供,并提供農業(yè)農業(yè)部認定的檢驗機構出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。 4． 中和劑。選擇的中和劑應對試驗菌種無(wú)抑制作用,在最大試驗濃度的消毒劑中加入中和劑后對試驗菌種的抑制作用應完全消除,此時(shí)中和劑的濃度可以作為本試驗添加濃度。 常用消毒劑的中和劑參見(jiàn)下表。
試驗菌(毒)種選用水產(chǎn)動(dòng)物臨床常見(jiàn)的、有代表性的菌(毒)種或目的(目標)菌(毒)種。 1． 實(shí)驗室消毒能力測定試驗一般分四組,即受試消毒劑組、對照消毒劑組、空白對照(不感染不處理)組和陰性對照(感染不處理)組。每組試驗應做 3個(gè)平行。 (1)定性測定。細菌、真菌孢子測定方法:先將制備好的菌液表：常用消毒劑的中和劑消毒劑（濃度） 中和劑（濃度）含氯（溴、碘）消毒劑（有效氯、溴或碘 0.1～0.5%）硫代硫酸鈉（0.1%～1.0%）過(guò)氧乙酸（0.1～0.5%） 硫代硫酸鈉（0.1%～0.5%）過(guò)氧化氫（1.0～3.0%） 硫代硫酸鈉（0.5%～1.0%）戊二醛（2%） 甘氨酸（1%）季銨鹽類(lèi)消毒劑（0.1～0.5%） 吐溫 80（0.5～3.0%）洗必泰（0.1～0.5%） 卵磷酯（1.0～2.0%）含表面活性劑的各種復方消毒劑 吐溫 80（3.0%）酚類(lèi)消毒劑（3.0～5.0%） 吐溫 80（3.0～5.0%）堿類(lèi)消毒劑 等當量酸酸類(lèi)消毒劑 等當量堿采用比濁法進(jìn)行活菌計數,然后用 0． 03M 的 pH 為 7． 2 的磷酸鹽緩沖液稀釋成含菌 5×10 5 ~5×10 6 CFU/ ml 的試驗菌液,取 9 支試管,每管加無(wú)菌蒸餾水 2． 5ml,于第 1 管加一定濃度的受試消毒劑溶液2． 5ml,混勻后,由第 1 管取 2． 5ml 至第 2 管,按二倍稀釋法依此類(lèi)推,直至第 9 管,混合后取出 2． 5ml 棄去,向每管加 2． 5ml 試驗菌液后置 20℃水浴中 5、10、30、60min 或其它特定的作用時(shí)間。以對照消毒劑溶液代替受試消毒劑溶液,同時(shí)進(jìn)行上述各步驟,作為對照消毒劑組;另取 2 支試管,進(jìn)行平行試驗,其中一管只加菌液不加消毒劑的作為陰性對照,另一管不做任何處理的作為空白對照。每管各取 0． 5ml 加入含足量中和劑的 4． 5ml 液體培養基中,混勻,中和 10min,再取出 0． 5ml 加入 4． 5ml 液體培養基內。將接種菌株的培養基管置適宜溫度下培養,若發(fā)生混濁即表示有細菌生長(cháng)。若肉湯不變混濁,應繼續培養至第 7d,若仍不混濁方可判為無(wú)菌生長(cháng)。 結果判定:以無(wú)菌生長(cháng)管消毒液的最低濃度為最低殺菌有效濃度,以無(wú)菌生長(cháng)管的最短消毒時(shí)間為該濃度殺菌最快有效時(shí)間。真菌菌絲測定方法在試驗菌塊制備、接種、中和劑添加體積和結果觀(guān)測等方面應根據實(shí)際情況進(jìn)行調整。 (2)定量測定。細菌、真菌孢子測定方法:先將制備好的菌液采用比濁法進(jìn)行活菌計數,然后用 0． 03M 的磷酸鹽緩沖液稀釋成含菌 10 6 ~10 7 CFU/ ml 的試驗菌液;吸取 0．5ml 試驗菌液分別于測試濃度的受試消毒劑和對照消毒劑溶液4． 5ml 內,置 20℃ 水浴5min 或其它特定的作用時(shí)間,立即分別吸取上述菌藥混合液1． 0ml,加入 9． 0ml 與受試消毒劑和對照消毒劑相對應的中和液中混勻。以 0． 03M 的磷酸鹽緩沖液代替消毒劑溶液,同時(shí)進(jìn)行上述各步驟,作為陰性對照組;以不做任何處理的作為空白對照。中和10min 后采用平板菌落計數法進(jìn)行活計數,計算殺菌率及殺滅指數。 活菌培養計數時(shí),細菌繁殖體在適宜的溫度下培養 18 ~ 24h,觀(guān)察最終結果;細菌芽孢培養溫度為 37℃,培養時(shí)間一般為 72h 后觀(guān)察最終結果;真菌孢子在適宜的溫度下培養 24h ~ 72h 后觀(guān)察最終結果。 消毒 t 時(shí)的殺菌率(Pt)= ((n0-nt) / n0)×100% 以上兩式中:n0 為對照組活菌數,nt 為實(shí)驗組活菌數。 病毒測定方法:分別取不同濃度的消毒劑 4． 5ml 與適當濃度的特定病毒溶液 0． 5ml 混合,置 20℃ 水浴 5min 或其它特定的作用時(shí)間,同時(shí)設生理鹽水或培養基為對照組。分別取上述各組溶液各 1ml,加入中和劑 9ml,混勻,作用 10min,倍比稀釋,每個(gè)稀釋度接種到敏感細胞上,測定其病毒滴度。 病毒滅活率% =(消毒前病毒滴度-消毒后病毒滴度) / 消毒前病毒滴度×100% 2． 養殖水體現場(chǎng)消毒試驗。在完成實(shí)驗室定性、定量消毒能力測定的基礎上,進(jìn)行特定病原菌和自然菌養殖水體現場(chǎng)消毒試驗。根據消毒劑的殺菌性能及對水體理化指標、靶動(dòng)物的影響程度,通過(guò)本試驗確定實(shí)際使用方法、濃度及作用時(shí)間等。 (1)目標病原菌養殖水體現場(chǎng)消毒試驗。 試驗用水:應符合 GB11607《漁業(yè)水質(zhì)標準》要求,在 15d 以?xún)?/span>未使用過(guò)任何消毒劑的池塘中取 200L 養殖水,分別裝入 6 個(gè)水簇箱中,每箱 20L,試驗前后測定并記錄水體的 pH、溶解氧、水溫、氨氮、亞硝酸鹽和鹽度(海水)等指標。將特定病原菌制成菌液加入養殖水體中,使水體中菌液濃度為 10 5 ~10 6 CFU/ mL。 試驗分組:受試消毒劑組 一般設高、中(推薦使用濃度)、低三個(gè)濃度受試消毒劑試驗組。 測定方法:消毒前和消毒后 10、30、60min 或其它特定的作用時(shí)間采混勻后的各組水樣 1ml,迅速加入 9ml 中和液中混勻,采用平板菌落計數法分別進(jìn)行活菌計數,計算殺菌率。 結果判斷:殺菌率 = (消毒前活菌數-消毒后活菌數) / 消毒前活菌數×100% (2)養殖水體現場(chǎng)消毒試驗。試驗宜安排在歷年發(fā)病地區,飼養規范,實(shí)驗條件能得到有效控制的養殖場(chǎng)的三口池塘中進(jìn)行。每個(gè)試驗池應相對獨立,位置、水深、面積、環(huán)境條件基本相似。試驗水體應符合 GB11607《漁業(yè)水質(zhì)標準》要求,在 15d 以?xún)任词褂?/span>過(guò)任何消毒劑的養殖池塘水。試驗期間應測定并記錄試驗水體的水溫、pH、溶解氧、透明度、氨氮、亞硝酸鹽和鹽度(海水)等水質(zhì)指標,同時(shí)觀(guān)察試驗池中魚(yú)的攝食量、活動(dòng)狀態(tài)等。該試驗只設受試消毒劑組,不設空白對照組和對照消毒劑組(由于每口池塘中的微生物種群、數量以及水體理化指標有差異),根據受試消毒劑擬推薦的用法和用量進(jìn)行試驗,試驗應做 3個(gè)平行。消毒前和消毒后 30、60、120min 或其它特定的作用時(shí)間,沿試驗池塘對角線(xiàn)選取 3 個(gè)點(diǎn)(對角線(xiàn)兩端離池塘邊角 3m 各 1 個(gè)點(diǎn),正中心 1 個(gè)點(diǎn)),用規格 1L 采水器分別于 3 個(gè)點(diǎn)的水面下 10 ~15cm 處(或其它特定要求的取樣點(diǎn))取水樣,然后混合,吸取混勻后的水樣 1ml 迅速加入 9ml 中和液中混勻,置 4℃處冷藏保存不得超過(guò) 6 小時(shí)。采用平板菌落計數法分別進(jìn)行活菌計數,計算殺菌率。 3． 影響消毒劑消毒效果因素試驗。用于養殖水體的消毒劑,其藥效往往受目標菌的種類(lèi)、消毒劑濃度、消毒作用時(shí)間、消毒時(shí)的水溫、pH 值及有機物濃度等因素的影響。應采用單因素試驗法(即除被試因素外,其他有關(guān)因素都固定在常用水平上)進(jìn)行定量消毒試驗,測定不同影響因素、不同水平上的殺菌率,并互相比較。 4． 田間藥效試驗。水產(chǎn)養殖用消毒劑以潑灑或藥浴方式用于養殖水體后,可通過(guò)體表和鰓等組織器官進(jìn)入水產(chǎn)動(dòng)物體內,對體內病原菌起到抗菌作用,具有治療水產(chǎn)動(dòng)物疾病的功效,其藥效試驗設計方案參見(jiàn)《水產(chǎn)養殖用抗菌藥物田間藥效試驗技術(shù)指導原則》。 1． 試驗的可靠性。在整個(gè)試驗中,對照消毒劑組必須有效;在實(shí)驗室消毒能力測定試驗中,陰性對照組必須有菌生長(cháng),空白對照不能有菌生長(cháng),否則試驗需重做。 2． 測試消毒效能,其殺菌率或病毒滅活率應達 99． 9% 以上。測試殺菌(滅毒)效能,其殺菌率或病毒滅活率須達 100% 。當低于此指標時(shí),則應提高消毒劑的濃度或延長(cháng)作用時(shí)間,重新試驗。 3． 消毒效果。以殺菌率或病毒滅活率進(jìn)行判斷,并將受試消毒劑組間、受試消毒劑組與對照組(包括對照消毒劑組或感染不施消毒劑組)進(jìn)行比較,對結果進(jìn)行定性和定量的統計分析。常用的生物統計方法有 t 檢驗、x 2 檢驗、方差分析等,應根據實(shí)際情況進(jìn)行選用。 4． 結論。根據消毒效果統計結果,同時(shí)結合消毒劑對水體理化因子、靶動(dòng)物的影響情況以及影響消毒劑消毒效果因素試驗結果,確認受試消毒劑的推薦劑量;并提出或確認臨床應用該消毒劑的注意事項、不良反應等。 為公正、科學(xué)地評價(jià)消毒劑的臨床療效,試驗報告應包括如下內容: 3． 試驗設計者、負責人、主要試驗人員及聯(lián)系方式; 4． 試驗水質(zhì)條件:如水溫、溶解氧、pH、鹽度等; 5． 受試消毒劑需注明消毒劑名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)批號、含量(或規格),對照消毒劑還需注明用法用量; 6． 消毒能力定性與定量測定方法、養殖水體目標菌與自然菌的消毒試驗方法; 7． 影響消毒劑藥效因素試驗方案(必要時(shí)); 8． 消毒劑田間藥效試驗方案(必要時(shí)); 9． 試驗觀(guān)察現象與結果、數據處理與效果評價(jià)等; 13． 應歸檔保存原始資料,并注明保存地點(diǎn)、聯(lián)系人及聯(lián)系電話(huà)。 1． 消毒,是指用物理的、化學(xué)的或生物學(xué)的方法殺滅或清除外環(huán)境中的各種病原微生物,使之達到不至于引起疾病的數量。所謂“外環(huán)境”除包括無(wú)生命的固體物表面、液體和氣體外,也包括有生命的動(dòng)物機體的體表和淺表體腔。 2． 消毒劑,是主要用于殺滅外環(huán)境中病原微生物的化學(xué)藥物。 3． 抗菌,是指抑制動(dòng)物體內微生物的生長(cháng)繁殖,或將其殺滅。主要指動(dòng)物全身用藥。水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室安全試驗技術(shù)指導原則 為水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室安全試驗研究提供原則性指導。 水生動(dòng)物疫苗的安全性是考察其質(zhì)量的最重要指標之一。農業(yè)部公告第 442 號對獸用疫苗制品的實(shí)驗室安全試驗項目進(jìn)行了詳細規定。 實(shí)驗室及動(dòng)物實(shí)驗室的生物安全條件應符合國家有關(guān)實(shí)驗室生物安全標準。 1． 實(shí)驗室安全試驗應使用靶動(dòng)物進(jìn)行。有充分資料證明與靶動(dòng)物安全試驗結果有相關(guān)性時(shí),可使用其他敏感的水生動(dòng)物作為模式動(dòng)物。 2． 實(shí)驗室安全試驗中所用實(shí)驗動(dòng)物應健康易感,不攜帶影響試驗結果判定的特定病原或特定抗體。必要時(shí)應使用普通級或SPF 級易感實(shí)驗動(dòng)物。 3． 試驗用動(dòng)物的種類(lèi)、年齡、個(gè)體大小、體重和生理狀態(tài)(如性成熟)應與疫苗說(shuō)明書(shū)中擬規定的靶動(dòng)物相一致。試驗用動(dòng)物的來(lái)源/ 遺傳背景應盡量避免存在差異性。 5． 每批疫苗制品的實(shí)驗室安全試驗中所用水生動(dòng)物應不少于 30 尾,來(lái)源困難或經(jīng)濟價(jià)值高的動(dòng)物應不少于 5 尾。 在疫苗接種期間,實(shí)驗養殖用水的水質(zhì)參數,如溫度和鹽度(如淡水與海水)應與疫苗應用的實(shí)際養殖環(huán)境相似。必要時(shí)應設置合理的溫度梯度。 實(shí)驗室安全試驗中所用實(shí)驗室制品的生產(chǎn)用菌(毒、蟲(chóng))種、制品組成和配方等,應與規?；a(chǎn)的產(chǎn)品相同。實(shí)驗室制品應經(jīng)過(guò)必要的性狀、含量、純粹/ 純凈性等初步檢驗,且結果須在預期的可接受范圍內。實(shí)驗室制品中主要成分的含量應不低于規?；?/span>生產(chǎn)時(shí)的出廠(chǎng)標準。 1． 在試驗開(kāi)始前,應制定詳細的實(shí)驗室安全試驗方案,其內容應包括受試疫苗的種類(lèi),試驗開(kāi)始和結束的日期,實(shí)驗動(dòng)物的年齡、種類(lèi)等特征,疫苗配方,對照組的設置,每組動(dòng)物的來(lái)源和數量、飼養條件、試驗管理和觀(guān)察方式,結果的判定方法及標準等。 2． 試驗時(shí)應設置空白對照組。如有對照疫苗,還可設對照疫苗組。 可采用肉眼觀(guān)察和/ 或顯微鏡觀(guān)察方法,至少觀(guān)察 14 日。每日監測試驗用動(dòng)物的死亡、發(fā)病、全身和/ 或局部反應情況。應監測和記錄所有不良反應的性質(zhì)和頻率。 按照推薦的接種途徑,用適宜規格(日齡、體重或體長(cháng))的靶動(dòng)物,接種 1 個(gè)劑量,至少觀(guān)察 2 周。評估指標應包括臨床癥狀、局部炎癥、組織病變等。對于可用于多種動(dòng)物的疫苗制品,應用各種靶動(dòng)物進(jìn)行安全試驗。 (二)多次接種的疫苗制品應進(jìn)行單劑量重復接種安全試驗 按照一次單劑量接種的安全試驗進(jìn)行,但接種劑量為推薦免疫劑量的數倍至一百倍不等。通常情況下,滅活疫苗的安全試驗劑量為推薦免疫劑量的 2 倍,活疫苗的安全試驗劑量為推薦免疫劑量的 10 ~100 倍。根據不同使用途徑選擇合適的劑量。 (四) 對共患病原微生物或已有文獻報道有共感染的非靶動(dòng)物、 非使用日齡靶動(dòng)物的安全試驗(活疫苗可能適用) 有些病原可感染多種動(dòng)物或多個(gè)日齡段的動(dòng)物,這類(lèi)制品的安全試驗中,除應考察疫苗制品對靶動(dòng)物和使用日齡靶動(dòng)物動(dòng)物的安全性外,還應對非使用對象動(dòng)物和非使用日齡動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗室安全試驗,以考察對靶動(dòng)物群使用該疫苗制品后對非靶動(dòng)物群可能引起的安全風(fēng)險。 評估使用該類(lèi)疫苗免疫后,對周?chē)曫B的同品種易感動(dòng)物的潛在危害性及其對環(huán)境的污染,為正確使用疫苗提供科學(xué)依據。 (六) 對靶動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響試驗 對食用水生動(dòng)物的疫苗制品應進(jìn)行本項試驗。使用這類(lèi)疫苗制品后,觀(guān)察記錄一定周期內靶動(dòng)物的生長(cháng)情況,如體重變化、飼料系數等,評估疫苗制品對動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響。如果在一定試驗周期內無(wú)法評價(jià)對生產(chǎn)性能的影響,可用臨床試驗數據代替。 用于制備水生動(dòng)物疫苗的一些非生物源性物質(zhì),如礦物油佐劑、鋁膠佐劑等,用于食品動(dòng)物后,可能對人類(lèi)的生命健康造成危害,這類(lèi)制品的安全試驗中應包括有關(guān)化學(xué)物質(zhì)在靶動(dòng)物體內的殘留試驗,為制定該制品的休藥期提供必要的支持性數據。 上述實(shí)驗室安全試驗項目中,第(一)和(三)項試驗通常是必不可少的,第(二)、(四)、(五)、(六)、(七)項試驗有時(shí)不是必須的,應根據疫苗制品的種類(lèi)、性質(zhì)、靶動(dòng)物等具體情況選擇進(jìn)行。第(三)項內容通常是制定成品安全檢驗標準的最直接依據,應有連續 3 批實(shí)驗室疫苗制品的試驗數據。水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室效力試驗技術(shù)指導原則 為水生動(dòng)物疫苗實(shí)驗室效力試驗研究提供原則性指導。 水生動(dòng)物疫苗的免疫效力是考察其質(zhì)量的最重要指標之一。農業(yè)部公告第 442 號對獸用疫苗的實(shí)驗室效力試驗項目進(jìn)行了詳細規定。 實(shí)驗室及動(dòng)物實(shí)驗室的生物安全條件應符合國家有關(guān)實(shí)驗室生物安全標準。 1． 實(shí)驗室效力試驗應使用靶動(dòng)物進(jìn)行。有充分資料證明與靶動(dòng)物效力試驗結果有平行關(guān)系的,可使用其他動(dòng)物作為替代動(dòng)物。 2． 實(shí)驗室效力試驗中所用試驗用動(dòng)物應健康易感,不攜帶影響試驗結果判定的特定病原或特定抗體。必要時(shí)應使用普通級或SPF 級易感實(shí)驗動(dòng)物。 3． 試驗用動(dòng)物的種類(lèi)、年齡、個(gè)體大小、體重和生理狀態(tài)(如性成熟)應與疫苗說(shuō)明書(shū)中擬規定的靶動(dòng)物相一致。試驗用動(dòng)物的來(lái)源/ 遺傳背景應盡量避免存在差異性。 4． 每批疫苗制品的實(shí)驗室效力試驗中所用水生動(dòng)物應不少于 30 尾,來(lái)源困難或經(jīng)濟價(jià)值高的動(dòng)物應不少于 5 尾。 在疫苗接種期間,實(shí)驗養殖用水的水質(zhì)參數,如溫度和鹽度(如淡水與海水)應與疫苗應用的實(shí)際養殖環(huán)境相似。必要時(shí)應設置合理的溫度梯度。 實(shí)驗室效力試驗中所用實(shí)驗室疫苗制品的生產(chǎn)用菌(毒、蟲(chóng))種、制品組成和配方等,應與規?；a(chǎn)的產(chǎn)品相同。實(shí)驗室疫苗制品應經(jīng)過(guò)必要的性狀、含量、純粹/ 純凈性等初步檢驗,且結果須在預期的可接受范圍內。 為了同時(shí)證明產(chǎn)品“規程”中所規定的基礎種子使用代次范圍的合理性,通常用處于最高代次水平的病毒(或細菌)抗原制備疫苗后,進(jìn)行效力試驗。一旦試驗結果證明最高代次水平的疫苗具有令人滿(mǎn)意的免疫效果,則可認為規定范圍內的基礎種子均具有令人滿(mǎn)意的免疫原性。 如果每批規?；a(chǎn)的產(chǎn)品出廠(chǎng)時(shí)的“效力檢驗”采取與參考疫苗對比的方法,則在實(shí)驗室效力試驗中,除應使用實(shí)驗室制品進(jìn)行效力試驗外,還應用參考疫苗進(jìn)行系統的效力試驗。 1．在多數實(shí)驗室效力試驗中可能會(huì )使用攻毒用強毒。對已經(jīng)有國家標準強毒株的,應使用標準強毒株,必要時(shí)增加使用當時(shí)的流行株。對沒(méi)有國家標準強毒株的,可使用自行分離的強毒株,但需報告其來(lái)源、歷史和有關(guān)鑒定結果。 2．使用高致病性病原微生物的,應按有關(guān)規定事先獲得有關(guān)部門(mén)批準。 1．在試驗開(kāi)始前,應制定詳細的實(shí)驗室效力試驗方案,其內容應包括受試疫苗的種類(lèi),試驗開(kāi)始和結束的日期,試驗用動(dòng)物的年齡、種類(lèi)等特征,疫苗配方,對照組的設置,每組動(dòng)物的來(lái)源和數量、飼養條件、試驗管理和觀(guān)察方式,結果的判定方法及標準等。 2．試驗時(shí)應設置空白對照組。如有對照疫苗,還可設對照疫苗組。 該方法是考察水生動(dòng)物疫苗免疫效力的常規方法。其基本方法是:用實(shí)驗室疫苗制品接種一定數量的動(dòng)物,經(jīng)一定時(shí)間后,采用攻毒用強毒株同時(shí)對上述免疫動(dòng)物和對照動(dòng)物進(jìn)行攻毒,在攻毒后一定時(shí)間內,觀(guān)察動(dòng)物的發(fā)病或死亡情況,統計免疫及對照動(dòng)物發(fā)病率或死亡率,或計算相對保護率,評估制品的效力;必要時(shí),在觀(guān)察期結束時(shí),將所有動(dòng)物撲殺,進(jìn)行病理組織學(xué)檢查,有時(shí)還應進(jìn)行病原分離,根據免疫動(dòng)物和對照動(dòng)物的眼觀(guān)病理學(xué)變化、組織病理學(xué)變化或病原分離情況評估制品的免疫效力。靶動(dòng)物免疫攻毒試驗的具體方法可分為定量免疫定量強毒攻擊法、變量免疫定量強毒攻擊法、定量免疫變量強毒攻擊法等,具體試驗中可根據疫苗制品和疾病的具體情況選擇一種或數種適宜方法。 1． 定量免疫定量強毒攻擊法。該方法中以定量的受試疫苗接種適宜動(dòng)物,經(jīng)一定時(shí)間后,用定量的強毒進(jìn)行攻擊,觀(guān)察動(dòng)物接種后所建立的免疫力。 2． 定量免疫變量強毒攻擊法。該方法中將動(dòng)物分為兩大組,一為免疫組,一為對照組,兩大組又各分為相等的若干小組,每小組的動(dòng)物數相等。免疫組各小組動(dòng)物均用同一劑量的受試疫苗進(jìn)行免疫接種,經(jīng)一定時(shí)間后,與對照組一起,同時(shí)用不同稀釋度強毒進(jìn)行攻擊,觀(guān)察、統計免疫組與對照組各小組的發(fā)病率、死亡率、病變率或感染率,分別計算免疫組與對照組的 LD50(或 ID50),比較免疫組與對照組動(dòng)物對不同劑量強毒攻擊的耐受力。 3． 變量免疫定量強毒攻擊法(PD50 試驗)。該方法中疫苗稀釋為不同的免疫劑量,并分別接種動(dòng)物,間隔一定時(shí)間待動(dòng)物的免疫力建立以后,各免疫組均用同一劑量的強毒攻擊,觀(guān)察一定時(shí)間,用統計學(xué)方法計算能使 50% 的動(dòng)物得到保護的免疫劑量(PD50)。 4． 有關(guān)說(shuō)明。如因動(dòng)物來(lái)源困難等導致無(wú)法用靶動(dòng)物建立適宜的攻毒模型,并有充分的科學(xué)依據證明采用替代動(dòng)物抗體測定法、替代動(dòng)物免疫攻毒法等其他方法與靶動(dòng)物免疫攻毒效力之間有一定相關(guān)性時(shí),可采用替代方法取代靶動(dòng)物免疫攻毒試驗。 (二) 疫苗抗原( (細 細毒 菌或病毒) ) 含量與靶動(dòng)物免疫攻毒保護力究相關(guān)性的研究( (最 最驗 小免疫劑量試驗) )疫苗內抗原(細菌或病毒)含量與免疫攻毒保護率之間,在一定范圍內通常存在明顯平行關(guān)系,可根據最小免疫劑量試驗結果建立疫苗成品的抗原(細菌或病毒)含量標準,對符合抗原(細菌或病毒)含量標準的疫苗,就無(wú)需對每批疫苗進(jìn)行免疫攻毒效力檢驗。最小免疫劑量的試驗方法如下:用不同劑量的疫苗分別接種動(dòng)物,經(jīng)一定時(shí)間后進(jìn)行攻毒或采用已經(jīng)證明與免疫攻毒方法具有平行關(guān)系的替代方法進(jìn)行免疫效力試驗,統計出使動(dòng)物獲得較好保護力(通常應達到 80% ~ 100% )的最低的疫苗接種量,就是最小免疫劑量。如果疫苗使用對象包括多種動(dòng)物或多種日齡動(dòng)物,則應針對各種或各日齡段靶動(dòng)物測定最小免疫劑量。 1．用實(shí)驗室疫苗制品接種一定數量的動(dòng)物。接種后,每隔一定時(shí)間,用攻毒用強毒對一定數量的免疫動(dòng)物和未接種的對照動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行攻毒或采用已經(jīng)確認與攻毒保護率具有平行關(guān)系的血清學(xué)方法測定抗體水平,觀(guān)察其產(chǎn)生免疫力的時(shí)間、免疫力達到高峰期的時(shí)間及高峰期持續時(shí)間。以接種后最早出現良好免疫力的時(shí)間為該疫苗制品的免疫產(chǎn)生期,以接種后保持良好免疫力的最長(cháng)時(shí)間為免疫持續期。 2． 如果是季節性疾病,只要能夠證明疫苗的免疫力能持續到接種后的一年中疾病的自然發(fā)生期末。不論是否進(jìn)行加強免疫接種,均應提出在此后一年(或幾年)的發(fā)病季節中的免疫力情況。 3． 免疫期試驗應在嚴格控制的實(shí)驗室條件下進(jìn)行。若因免疫期過(guò)長(cháng)、人工飼養對實(shí)驗用動(dòng)物影響過(guò)大等原因導致已有實(shí)驗室條件不足以滿(mǎn)足整個(gè)免疫期內的試驗,則可在臨床試驗中進(jìn)行免疫期驗證。在進(jìn)行臨床免疫期試驗的過(guò)程中,應確保疫苗接種的靶動(dòng)物不發(fā)生并發(fā)性感染,有必要設同池未接種的靶動(dòng)物作對照(哨兵動(dòng)物),以監視動(dòng)物是否受到田間感染。 4． 主動(dòng)免疫的免疫期通常是指用受試疫苗進(jìn)行一次接種后提供的保護作用的持續期。通常應在所推薦的加強接種開(kāi)始的時(shí)間之前,對接種過(guò)的動(dòng)物進(jìn)行攻毒來(lái)確定。 5． 如有充分的試驗依據證明適當指標(如抗體水平)與靶動(dòng)物免疫攻毒保護率間存在良好的定性或定量關(guān)系,則可用替代指標來(lái)衡量疫苗接種后的免疫力。 6． 通常情況下,不接受用非靶動(dòng)物試驗獲得的免疫期試驗數據。 (四)血清學(xué)效力檢驗與靶動(dòng)物免疫攻毒保護相關(guān)性的研究 當成品的效力檢驗中采用血清學(xué)方法測定免疫動(dòng)物抗體反應,而不采用免疫攻毒試驗時(shí),應事先進(jìn)行平行關(guān)系驗證試驗,以證明選用該血清學(xué)方法的科學(xué)性。具體試驗方法是:用不同劑量的受試疫苗免疫接種動(dòng)物,以便獲得具有不同抗體水平的動(dòng)物,根據抗體水平的高低,將動(dòng)物分為若干組,用已經(jīng)選定的強毒株按照預定劑量進(jìn)行攻毒。對抗體水平與攻毒保護率之間的關(guān)系進(jìn)行分析。 有些傳染病病原存在多個(gè)血清型或血清亞型,應進(jìn)行交叉保護力試驗。其方法為:用推薦使用劑量疫苗接種一定數量的動(dòng)物,在產(chǎn)生免疫力后,分別用不同血清型或血清亞型的強毒株進(jìn)行攻毒,觀(guān)察其交叉保護力。通過(guò)本試驗篩選疫苗菌(毒、蟲(chóng))株,并為合理使用疫苗提供依據。 (六) 替代動(dòng)物的 效力檢驗與靶動(dòng)物效力檢驗結果相關(guān)性的研究 一些制品的效力檢驗用靶動(dòng)物來(lái)源困難、費用高,可使用替代動(dòng)物,但應進(jìn)行靶動(dòng)物與替代動(dòng)物免疫攻毒保護力平行關(guān)系的試驗研究,證明具有平行關(guān)系者,方可用替代動(dòng)物代替靶動(dòng)物。 (七) 不同接種途徑對靶動(dòng)物的效力試驗 水生動(dòng)物疫苗的接種途徑主要包括注射、口服和浸泡等。根據制品的種類(lèi)、特點(diǎn),以及相關(guān)試驗數據,選用合適的接種途徑作為推薦接種途徑。 (八) 接種后動(dòng)物體內抗體消長(cháng)規律的研究 免疫動(dòng)物后,定期采血測定免疫動(dòng)物產(chǎn)生抗體的最早時(shí)間、抗體高峰期、抗體持續期,為制定免疫程序提供依據。 上述實(shí)驗室效力試驗項目中,第(一)、(二)、(三)通常是必不可少的,第(四)、(五)、(六)、(七)、(八)項有時(shí)不是必須的,應根據制品的種類(lèi)、性質(zhì)、靶動(dòng)物、質(zhì)量標準等具體情況選擇進(jìn)行。第(一)項通常是成品效力檢驗標準的最直接依據,應有連續 3 批實(shí)驗室制品的試驗數據。
